直接免疫荧光法DIF检测红斑狼疮显示

AmiraElbendary,MBBCh,MSc,a,bChengZhou,MD,a,dManuelValdebran,MD,aYanYu,MD,a,eAbdAllahGad,MBBCh,cEunJiKwon,MD,fandDirkM.Elston,MDgNewYorkandPortChester,NewYork;Cairo,Egypt;BeijingandChangchun,China;andCharleston,SouthCarolina

背景：用直接免疫荧光法（DIF）诊断红斑狼疮（LE）的依据是表皮-真皮交界处（DEJ）免疫荧光阳性。

目的：本研究旨在探讨IgM在DEJ和附属器部位沉积对于红斑狼疮诊断的敏感性。

方法：本研究回顾性分析了例红斑狼疮和例其他免疫性皮肤病。观察IgG、IgM、IgA和C3在DEJ、毛囊的基质-上皮交界处和汗腺部位的沉积情况。记录病例是否有附属器结构。免疫反应物的沉积模式记录为线性、粗颗粒状或点状。

结果：红斑狼疮患者显示DEJ、毛囊基质-上皮交界处和汗腺部位IgM沉积最常见。与其他免疫性皮肤病相比，毛囊基质-上皮交界处和汗腺部位IgM沉积与红斑狼疮的诊断显著相关（p0.）。红斑狼疮和皮肌炎呈IgM颗粒状沉积，而其他免疫性皮肤病为线状沉积。

局限性：本研究是已归档病例的回顾性研究。

结论：附属器的基质-上皮交界处IgM颗粒状沉积提示红斑狼疮或皮肌炎的诊断。

关键词：皮肤型红斑狼疮；直接免疫荧光法；毛囊；IgM；免疫性皮肤病；狼疮带试验；汗腺。

缩略词：

DEJ：表皮-真皮交界处

DIF：直接免疫荧光法

FITC：异硫氰酸荧光素

SEJ：基质-上皮交界处

内容提要

IgM在狼疮带试验中最常见。

红斑狼疮病例IgM在毛囊基质-上皮交界处和汗腺部位呈颗粒状沉积最具特征性。

IgM在基质-上皮交界处和汗腺部位沉积对于红斑狼疮诊断显示良好的敏感性和特异性。皮肌炎可表现为相似的模式

自身免疫性大疱病的靶抗原可见于表皮、汗腺和毛囊周围1-4。红斑狼疮各亚型的DIF阳性率不同，系统性红斑狼疮约为50-90%、急性皮肤型红斑狼疮约80%、盘状红斑狼疮为55-70%、以及亚急性皮肤型红斑约为40%5-7。“狼疮带”阳性一般定义为DEJ部位任何的免疫反应物呈颗粒状线性沉积带，但是应注意一些研究者认为只有在避光部位IgM或IgG单独或伴其他免疫反应物呈颗粒状沉积才可诊断5。据报道IgM是红斑狼疮最常见的免疫反应物5,8,9。附属器部位IgM沉积对于红斑狼疮诊断的敏感性和特异性尚未见报道。

本研究旨在探讨DIF检测红斑狼疮的附属器部位免疫反应物沉积模式，并且评价IgM在DEJ和附属器沉积对于红斑狼疮和其他免疫性皮肤病诊断的敏感性。

方法

本研究对DIF阳性标本进行回顾性分析。纳入例红斑狼疮和例其他免疫性皮肤病，包括36例大疱性类天疱疮、33例天疱疮、25例疱疹样皮炎、22例过敏性紫癜、21例迟发性皮肤卟啉病、14例IgA大疱性皮病、4例皮肌炎和3例获得性大疱性表皮松解症。根据病史、HE皮肤组织病理和DIF免疫病理明确诊断。搜集-年纽约州纽约市Ackerman皮肤病理学学会和纽约州切斯特港DermpathDiagnostics的档案库得到所有的病例资料。年5-6月进行阅片。DIF切片丧失免疫反应性不足以支持原有诊断者排除。遵循回顾性人群研究豁免机构委员会审查的有关条例，未检查补充临床资料。

观察每个病例中DEJ、毛囊皮脂腺单位和汗腺部位IgG、IgM、IgA和C3的沉积情况。记录病例是否有附属器结构。

免疫反应物的沉积模式记录为线性、粗颗粒状或点状。

本研究所有标本均为归档切片。应用Michel运输基质(BBCBiomedical,MtVernon,WA)运送标本组织，标准化流程处理。应用C3-FITC、IgG-FITC、IgM-FITC和IgA-FITC(Ventana,Tucson,AZ)染色，然后在培养皿中化学清洗(BBCBiochemical)5分钟。用冰冻包埋剂(Sakura,Torrance,CA)包埋组织以进行冰冻切片。初次阅片后，切片暗室室温保存。本研究检查的切片收集后室温保存5年。本研究组前期报道，这种处理和保存方法使切片保持良好的免疫反应活性可长达5年10。7例切片从皮肤病理诊断室获得，在4℃冰箱保存了6个月。

统计学分析

应用统计学软件(SPSSAdvancedStatistics,Version22,IBMCorp,Armonk,NY)进行数据分析。定性资料表达为率和百分比。应用x2检验分析定性变量间的相关性。

所有检验均为二尾检验。p值0.05具有统计学意义。

结果

例红斑狼疮中24例附属器缺失，其DEJ部位IgG、IgM、IgA和C3的沉积率分别为76%、89%、60%和73%。另外76例有附属器结构，其毛囊部位IgG、IgM、IgA和C3的沉积率分别为75%、%、67.1%和81.57%，汗腺部位IgG、IgM、IgA和C3的沉积率分别为76.3%、88.15%、63.15%和72.36%。免疫反应物的沉积模式为DEJ、沿毛囊和汗腺SEJ部位呈颗粒状沉积。而皮脂腺和汗管无沉积。其他免疫性皮肤病的沉积率和模式总结见表I。

DEJ：表皮-真皮交界处。

红斑狼疮最常见的免疫反应物沉积模式为IgM沿DEJ、毛囊SEJ（见图1）和汗腺沉积，IgG次之。本研究中其他免疫性皮肤病的免疫反应物沉积模式符合现有标准，表现为线装IgA大疱性皮病呈IgA伴C3沉积；寻常型和毛囊性天疱疮为IgG伴C3沉积；疱疹样皮炎为IgA沉积；大疱性类天疱疮为IgG伴C3沉积；迟发性皮肤卟啉病呈IgG沉积；皮肌炎呈IgM伴IgG沉积；获得性大疱性表皮松解症为IgG沿DEJ沉积。

表II显示有附属器组和附属器缺失组DEJ部位IgG、IgM、IgA和C3的沉积率。应用自由度为1的Pearsonx2检验分析，结果表明DEJ部位两组之间无明显差异。红斑狼疮有附属器组与其他免疫性皮肤病相比，DEJ部位IgG、IgM、IgA和C3的沉积率均有显著性差异（见表Ⅲ）。而附属器缺失组与其他免疫性皮肤病相比，DEJ部位仅IgM和IgA的沉积率有显著性差异，IgG和C3的沉积率无明显差异。应用ManteleHaenszel检验对组合数据中附属器存在与否进行校正后，结果显示红斑狼疮与与其他免疫性皮肤病相比IgG和C3的沉积率有显著性差异。

LE：红斑狼疮。

DEJ：表皮-真皮交界处。

红斑狼疮与其他免疫性皮肤病在DEJ、毛囊和汗腺部位不同免疫反应物的沉积率比较情况见表Ⅴ。红斑狼疮与其他免疫性皮肤病相比，IgM在附属器的沉积率有显著性差异（p0.），沉积模式为颗粒性。

红斑狼疮与其他免疫性皮肤病相比，附属器部位IgM沉积的诊断敏感性、特异性、阳性和阴性预测率见表Ⅵ。

讨论

据Burnham等人报道，红斑狼疮患者皮损DEJ处有颗粒状IgG、IgM和IgA沉积11。多项研究表明DEJ部位最常见的免疫沉积物是IgM，而IgA最少5,8,9。有研究检测了IgG、IgM、IgA和C3在基底膜带、胶原纤维、透明小体、毛囊基底膜带、汗腺和立毛肌部位的沉积情况，但是未研究IgM的沉积程度12。进一步的研究对DIF检测各种免疫性皮肤病中附属器与DEJ部位免疫反应物沉积的诊断敏感性进行了比较，结果显示在毛囊皮脂腺处和汗腺部位沉积对诊断红斑狼疮的敏感性最高，寻常型天疱疮毛囊皮脂腺单位沉积和类天疱疮汗腺处沉积次之，循证医学表明免疫反应物在附属器沉积对诊断疱疹样皮炎的敏感性最差13。

本研究证实IgM是红斑狼疮最常见的免疫沉积物。毛囊SEJ沉积率最高，DEJ和汗腺SEJ次之。红斑狼疮的IgM沉积率比其他免疫性皮肤病更高。进一步对IgM沉积进行分析，结果显示红斑狼疮患者汗腺SEJ沉积诊断敏感性高，而毛囊SEJ沉积诊断特异性较高（见表Ⅵ）。较高的阳性和阴性预测值和预测率支持附属器部位IgM沉积对于诊断红斑狼疮具有显著意义。毛囊皮脂腺单位的抗原表位可能参与红斑狼疮皮肤损害的发生。Ⅶ型胶原在DEJ和基质-附属器-上皮交界处表达，而红斑狼疮的亚型可产生抗Ⅶ型胶原抗体14,15。另一种可能参与系统性红斑狼疮疾病发生的抗原，即细胞外DNA可在DEJ和毛囊部位表达16。朗格汉斯细胞毛囊漏斗部浸润可能在T细胞介导的炎症反应中发挥作用17。

结论

与其他免疫性皮肤病相比，IgM沿皮肤附属器沉积对于红斑狼疮的诊断具有良好的敏感性和特异性。红斑狼疮为颗粒状沉积，而其他免疫性皮肤病为线状沉积。本研究可能有助于DIF检测免疫性皮肤病时缩小鉴别诊断范围。包括附属器结构的全层活检标本更具诊断意义。

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