乙肝表面抗原ldquo假阳性rdq

文章来源:大疱病   发布时间:2021-8-28 13:01:08   点击数:
 

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临床案例

近日,我科于乙肝表面抗原检测过程中有一特殊案例,对此进行分析与讨论:

主诉:孕9月,时感下腹部疼痛不适3小时余,与年4月8日5点18分入院。

病史:孕产妇女37岁,足月妊娠。

检测经过:于4月8日入院行急诊化验检查:肝肾功能、血尿便常规无异常,传染病四项急诊行胶体金法快速检测,丙肝抗体阴性、梅毒螺旋体抗体阴性、HIV抗体阴性。其中乙肝五项表面抗原阳性(艾博生物、批号),报告可疑,建议酶免法复查。

于5月1日酶免法复查表面抗原,结果阴性(安图生物、批号)。再次换艾博试剂复查仍为阳性(批号:017030),同时用表面抗原试纸条测试,结果阴性。担心漏检,再次报告可疑,建议用化学发光定量做乙肝五项检测,进一步确诊,化学发光检测结果仍为阴性,通过与主管医生和家属沟通,最终确认结果:乙肝五项表面抗原阴性。

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讨论与分析

通过查阅相关文献,我科就此案例进行讨论与分析,以便降低今后工作中假阳性率与假阴性率。

5种不同乙肝五项指标检测方法其特异性、灵敏度、与标准药盒对比的符合率的对比如下:

检测项目(%)

特异性

灵敏度

符合率

放射免疫检测

99.1

97.3

97.3

酶标检测

99.1

93.5

93.5

时间分辨荧光免疫检测

99.3

99.6

99.6

化学发光检测

99.

98.8

98.8

胶体金标法

96.6

73.8

91.

(来源:《医学信息》年第04期)

胶体金法引起假阳性的因素:

1.使用胶体金试纸检测的时容易受到标本中其他物质的干扰,可造成出现了假阳性结果。

.加了过多的血液,或者缓冲液,使试纸太湿润,在检测区形成的一个红印,可能造成看上去是一条假阳性带。

3.有其他疾病,形成的交叉反应,出现假阳性。

4.服用一些药品,也会造成试纸测的时候出现假阳性。

5.检测产品的问题出现假阳性,这种机率是非常低的,在出厂之前都做过了严格详细的测试。6.使用金标法进行检测目前还不够成熟,其特异性与灵敏度不高。

03

处理方法

发现老年人、孕产妇血清中的杂蛋白的干扰,会引起假阳性。当使用胶体金法试剂作为快速筛查试剂时,存在灵敏度和特异度不高、假阳性结果出现,同时为防止对高危人群的漏检,工作中应采用酶免法复查。我科为完善传染病胶体金法,制定结果报告流程:急诊传染病、快检中,若出现阳性结果先报告可疑,与医生和患者沟通---建议酶免法复查,依照酶免结果报告,高危人群的阴性结果建议酶免复查,如遇特殊情况,建议进一步检查。

04

酶免法假阳性分析1内源性因素

?年龄因素

老年人容易出现免疫功能异常,产生一些异常蛋白质干扰了检测的结果出现假阳性。

?疾病因素

类风湿关节炎、红斑狼疮、糖尿病、自身免疫性疾病等可使患者体内含有嗜异性抗体,自身抗体、类风湿因子等,这些特殊成分在反应过程中有一定的吸附作用,多为体内某些抗原物质干扰所致产生假的显色反应而出现假阳性。标本因素

?标本处理不彻底

血液抽出后未完全凝固而离心分离血清不能使纤维蛋白原完全析出,加样后板孔中形成纤维蛋白薄膜或絮状物,造成洗板不彻底干净,酶残留在反应孔中,使反应孔吸光度值偏高,出现假阳性,待测血清中混有纤维蛋白原,这种物质易沉淀或附着在聚乙烯空内不易洗净,试验表明在较高的离心转速(/min)和较长的离心时间(10/min)之上,血液标本被充分地离心分离后,使红细胞和纤维蛋白充分沉淀,可以在加样时避免加入这两种干扰物质对试验结果的影响。

?标本溶血

标本溶血时细胞内液的各种活性酶以及具有酶活性的物质与底物非特异性结合,洗涤时不易洗去,催化底物产生一定的显色反应,使本底吸光度值偏高形成假阳性。

?细菌污染

标本放置、处置不当被细菌污染,一些细菌体内可能含有内源性辣根过氧化物酶会对相应的酶做标记的测定方法产生非特异性干扰,造成弱的假阳性反应。3操作因素聚苯乙烯因其具有较长的吸附蛋白质的性能而被广泛用于ELISA试验的固相载体,聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的,因此需要通过洗涤清楚在反应过程中,非特异性地吸附于固相载体的干扰物质,洗涤在ELISA过程中虽不是一个反应步骤,但却决定着试验的成败,可以在加样前离心时得以控制,同样也可以通过适当增加洗涤的次数和浸泡时间减轻或避免对试验结果的影响,同样对于血液存在的非特异性的lgG的样本很难在加样时将其去除,那么解决的最佳时机就是洗涤过程。

加样太快,加样时加在孔壁上或有气泡。

底物液反复使用被污染或被强光照射时间过长。

板要平整,尤其是在洗板机洗板的过程中,往往是3排一起洗,如果板不平,就很可能造成洗液有残留,从而导致非特异性结合不能清除干净,对实验结果造成干扰。

洗液温度实验表明:洗液温度也会影响洗板的干净程度,尤其是冬天温度过低时容易出现“花板”问题,因此,最好保持在室温在0-30℃。

洗液未注满孔,孔壁洗涤不干净也易造成假阳性现象。

洗液要新鲜配置,洗液要临用前新鲜配置,放置时间过长易产生絮状物或浑浊,造成赌孔导致假阳性。

洗板次数不够或洗涤间隔时间过短也会造成由于洗板不净而造成假阳性,孵育时间过长也会造成假阳性;由于样本较多,加样后未及时放入孵育箱,反应板在室温呆的时间过长,既间接增加了孵育时间,导致孵育时间过长。

4仪器因素

?酶标仪是垂直对反应孔比色,反应孔底部污染时,出现反应孔吸光度值偏高。

?洗板拖尾现象,洗板机在洗板过程中,出水针出水不畅,滴滴答答不间断出现水滴,造成板上水过多,拍板不干净,

5方法学因素

?厂家试剂盒,由于不同厂家的诊断试剂所包被的抗原配比以及抗原纯度不尽一致,造成灵敏度和特异性不同,因此也造成了假阳性的产生。三代免疫试剂盒只检测抗体,被某些身体不明抗原干扰,导致的假阳性。

?实验灰区,在阳性与阴性之间有一条明显的分界线,作为阳性判定值(cutoff)来判定结果,一般把检测值S/COV值在0.6-1范围内时作为灰区带,因此当1<S/CO≤0.6时,真反应性显色的可能性小,多为体内某些抗原物质干扰所致,实验室检测人员应依据实验检测结果,结合受检者相应病史和个体状况进行综合分析,应进行确认实验,避免判定假阳性。

?“钩状效应”的产生,需对标本进行稀释重复检测。

?酶标仪的波长选择,建议酶标仪比色时选择双波长,即敏感波长(主波长)和非敏感干扰波长(次波长),最后从仪器上得到的读数为敏感波长与非敏感干扰波长之差,排除(板孔的划痕、污迹)干扰。

ELISA、胶体金法是目前常用的病毒筛选方法。胶体金法操作简单、判断简单,但是特异性比较差,容易出现假性结果.ELISA敏感度和特异性都比较理想,但是操作步骤多耗时长,适合大批量标本。

全自动化学发光法,操作简单,随来随检,灵敏度和特异性都比较高,虽然检测成本相较于金标法和ELISA偏高,但是确实是目前比较好的筛查方法。日常工作中出现HIV反应性结果的情况,不要惊慌,任何一种检测都不可能达到%特异性的,即使化学发光的HIV第四代检测试剂也会出现假阳性。要理性看待这种情况,完善自己实验室复检和送检流程,按照主管部门的规定送检,避免结果的误报。

作者:闫昕伟

单位:医院

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