自身免疫性大疱性皮肤病的血清学诊断二

IIF是检测AIBD自身抗体的标准方法。由于组织基质具有高灵敏度，所以通常建议优先使用这些底物进行疾病筛查。下面我们将对IIF方法进行详细说明。

IIF的基质

图1IIF法检测AIBD的不同组织底物

注：(A,B)猴食管(C,D)猴盐裂皮肤(E)大鼠膀胱(F)猴肝。

抗原血清学检测

通过只选择免疫反应性的表位和删除引起非特异性反应的区域的重组表达方法，提高检测结果的敏感性和特异性。如，重组四聚体BP-NC16A-4x和麦胶蛋白融合肽三聚体（GAF-3X）的抗体结合位点数目实现倍增。

IIF中的重组单特异性底物

将底物涂覆在毫米大小的生物芯片的反应区，滴定平板技术孵育，可实现相同条件下多个样品的标准化平行孵育。

重组IIF底物可分为两类:

第一类，目标抗原在人细胞系HEK中表达，该细胞系提供了真实的构象折叠和翻译后修饰。可用于AIBD血清学重组的细胞基质见(图2A-D)。

第二类，纯化的重组抗原被直接涂覆在生物芯片上。若检测结果阳性，抗原区域将发出特定模式的荧光(图2E,F)。

图2生物芯片为基础重组单一特异性IIF底物检测

和鉴别AIBD疾病中的自身抗体

IIF中的多参数生物芯片马赛克

重组单一特异性IIF底物可与标准化生物芯片马赛克中的经典组织切片并排分析(图3)。有助于不同类型AIBD的鉴别诊断。特别是在诊断困难的情况下，与传统的多步方法相比，这种多参数技术更具有成本优势和时间效率。

图3多参数的生物芯片马赛克

关于IIF马赛克诊断技术的研究结果表明，该方法对天疱疮和大疱性类天疱疮有较高的敏感性和特异性。例如，猴食管的敏感性为83%(PV)、98%(PF)和69%(混合性天疱疮组)，特异性为89-%。抗Dsg1的敏感性为19-52%(PV)，90%(PF)，38%(混合性天疱疮组)，特异性为99%。抗Dsg3检测的敏感性为98-%(PV)和87%(混合性天疱疮组)，特异性为97-%。在BP中，食管基底膜区染色和/或盐裂皮肤染色的敏感性和特异性分别为50-99%和77-%。抗BP抗体检测的敏感性和特异性分别为83-%和97-%。抗BP抗体检测的敏感性和特异性分别为30-67%和97-%。

vanBeek等人将“马赛克7”(图3A)与传统的多步骤操作进行了比较，两种方法诊断符合率较高(94%，kappa0.88-0.97)。Tampoia等人比较了IIF马赛克和ELISA(MBL/EUROIMMUN)的结果的一致性，发现抗Dsg3(kappa0.97-1.00)和抗BP(kappa0.94-0.90)的测定有很好的一致性。Ozkesici等人报道了IIF马赛克和ELISA(EUROIMMUN)之间的相关性：85%(抗Dsg1)、94%(抗Dsg3)和98%(抗BP)。

下一期，我们将重点讲解有关ELISA法对AIBD的检测意义。

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参考文献

SerologicalDiagnosisofAutoimmuneBullousSkinDiseases.FrontiersinImmunology()doi:10./fimmu...

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